熒光定量PCR儀是一種利用熒光信號實時監(jiān)測聚合酶鏈式反應(PCR)進程,并通過標準曲線對未知模板進行定量分析的儀器。該技術以其高靈敏度、高特異性及廣泛的應用領域,成為了分子生物學研究中不可缺工具。
熒光標記方法:在PCR體系中加入熒光基團,如SYBR Green I染料或特定的熒光探針(如TaqMan探針),通過熒光信號的變化來實時監(jiān)測PCR擴增過程。
Ct值計算:每個反應管內的熒光信號達到設定閾值時所經歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值。Ct值與起始模板拷貝數(shù)的對數(shù)呈線性關系,因此可以用來定量分析。
定量原理:通過已知起始拷貝數(shù)的標準品制作標準曲線,未知樣品的起始拷貝數(shù)可以通過其Ct值從標準曲線中計算得出。
熒光定量PCR儀應用領域:
基因表達研究:比較不同處理樣本或不同時間點特定基因的表達差異,廣泛應用于生物醫(yī)學研究。
病原體檢測:用于檢測和定量分析病原微生物或病毒含量,如新冠病毒檢測等。
遺傳疾病診斷:通過檢測特定的基因突變或染色體異常,輔助遺傳性疾病的診斷和產前診斷。
藥物開發(fā):在新藥研發(fā)過程中,用于驗證藥物靶點的有效性及藥物作用機制的研究。
環(huán)境監(jiān)測:檢測環(huán)境樣本中的微生物污染程度或特定污染物的基因標志物。