細胞生物學研究、創新藥開發等領域經常會進行細胞體外培養,但是很多實驗員不知道該怎么選購細胞、細胞培養基、細胞培養試劑,本節小編帶你初步了解一下細胞系的選擇技巧、購買細胞培養基應考慮的因素。
一、細胞培養的環境條件
細胞的體外培養需要為細胞創造良好的細胞的存活和增殖環境,這樣的環境條件包括培養溫度、濕度和 CO 2水平、營養成分、酸堿度、滲透壓等。
下表為大多數哺乳動物細胞的細胞培養的適宜條件。
酸堿度 7.0–7.4
滲透壓 280–320 mmol/千克
二氧化碳_ 5–10%
溫度 35–37°C
二、細胞系購買時應考慮的因素
細胞系購買可以從相對完善的細胞庫或細胞供應處進行購買。蘇州阿爾法生物提供的常用細胞庫里的細胞株適用于基因編輯、新藥開發等領域。 細胞系的選擇需要考慮到細胞系的功能特點、生長速率、鋪板效率、生長條件和生長特征、克隆效率、培養方式等因素,如果您想高產量表達重組蛋白,您可以選擇可以懸浮生長的快速生長細胞系。
不同的細胞系其生長特點以及功能是不一樣的,比如:CHO細胞,HEK細胞,VRO細胞為哺乳動物細胞多用于抗體開發、腫瘤研究、功能蛋白新藥開發等領域;成纖細胞由于細胞形態扁平、規則故多使用貼壁培養的方式進行培養,規模化擴培可使用貼壁生物反應器進行培養。
三、細胞培養基購買應考慮的因素
培養的細胞一般需要使用細胞培養基。配制細胞培養基時需要考慮四種關鍵成分,即:基礎培養基、谷氨酰胺、血清和抗生素。
1. 基礎培養基 基礎培養基是營養物質與鹽的混合物。常見的培養基有MEM、DMEM 和 RPMI培養基、F12培養基等。多數使用液體培養基。
2.谷氨酰胺 谷氨酰胺是細胞生長所必需的必需氨基酸。可以購買含有谷氨酰胺、不含谷氨酰胺或含有穩定的二肽谷氨酰胺替代品的基礎培養基。重要的是要確保您的培養物在正常生長條件下含有谷氨酰胺。
3.動物血清 細胞通常在補充有動物血清的基礎培養基中生長。這被稱為“完整"介質。血清為細胞提供所需的生長因子和營養素。胎牛(胎牛)血清是常用的。血清目前主要有澳洲胎牛血清、美洲胎牛血清和國產胎牛血清等。在大多數情況下,選擇有的培養基已添加血清無需單獨購買。
4.抗生素 細胞培養基通常補充有青霉素和鏈霉素的抗生素組合,作為防止細菌生長的措施。使用無菌技術,可以在不使用抗生素的情況下培養健康的細胞培養物。
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